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鹽析法與抗體的分離純化

更新時(shí)間:2024-05-28   點(diǎn)擊次數:302次

鹽析法原理


蛋白質(zhì)的溶解度在必定范圍內隨鹽的濃度而改變。在低鹽濃度下溶解度跟著(zhù)鹽濃度而添加,當鹽濃度到達必定水平常,其溶解度又以不一樣程度降低并先后分出。其原理是因為蛋白質(zhì)分子的極性基團有著(zhù)靜電引力,當水中參加少數鹽類(lèi)時(shí),鹽類(lèi)離子與水分子對蛋白質(zhì)分子上極性基團的影響,使蛋白質(zhì)在水中溶解度增大。但鹽濃度添加到必定程度時(shí),水的活度降低,蛋白質(zhì)外表的電荷被中和,水化膜損壞,致使蛋白質(zhì)分子互相集合而沉積。鹽析法即是依據不一樣蛋白質(zhì)在必定濃度的鹽溶液中溶解度不一樣而到達互相別離的辦法。


鹽的挑選


蛋白質(zhì)鹽析常用中性鹽,主要有硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉等。其間使用最-廣的是硫酸銨,其長(cháng)處是溫度系數小,溶解度大(25℃時(shí)飽滿(mǎn)溶解度為4.1mol/L,即767g/L)。在不一樣的飽滿(mǎn)硫酸銨溶液范圍內,不一樣蛋白質(zhì)依次分出;并且硫酸銨價(jià)廉易得,分段效果好,不簡(jiǎn)單導致蛋白質(zhì)變性。

硫酸銨濃溶液的pH常在4.5~5.5之間,市售的硫酸銨還常富含少數游離硫酸,pH值通常在4.5以下,須用氨水調節其pH值至7.0擺布。


鹽析須知

1、鹽的飽滿(mǎn)度:鹽的飽滿(mǎn)度是影響蛋白質(zhì)鹽析的主要因素,不一樣蛋白質(zhì)的鹽析請求鹽的飽滿(mǎn)度不一樣。別離幾個(gè)混合組分的蛋白質(zhì)時(shí),鹽的飽滿(mǎn)度常由低到高逐步添加,每呈現一種蛋白質(zhì)沉積進(jìn)行離心別離后,再繼續添加鹽的飽滿(mǎn)度,使第二種蛋白質(zhì)沉積。如用硫酸鹽鹽析別離血漿蛋白,當飽滿(mǎn)度到達20%時(shí),纖維蛋白原首先分出;飽滿(mǎn)度增至28%~33%時(shí),優(yōu)球蛋白分出;飽滿(mǎn)度到達33%~50%時(shí),球蛋白分出;飽滿(mǎn)度大于50%以上時(shí),清蛋白分出,免疫球蛋白常在飽滿(mǎn)度在33%開(kāi)端分出。

2、pH值:在等電點(diǎn)時(shí),蛋白質(zhì)溶解度最小,簡(jiǎn)單沉積分出。故鹽析時(shí)除個(gè)別特殊情況外,pH值常挑選在被別離的蛋白質(zhì)等電點(diǎn)附近。

3、蛋白質(zhì)濃度:在一樣鹽析條件下,蛋白質(zhì)濃度越高越易沉積,高濃度雖對沉積有利,但濃度過(guò)高,也簡(jiǎn)單導致別的蛋白的共沉積,故有必要挑選恰當濃度,盡可能避免共沉積效果的攪擾。

4、溫度:因為高濃度的鹽溶液對蛋白質(zhì)有必定保護效果,鹽析操作一般可在室溫下進(jìn)行,但在使用某些中性鹽進(jìn)行鹽析時(shí),溫度對鹽溶解度的影響對比明顯。

5、脫鹽:蛋白質(zhì)用鹽析沉積別離后,常需求脫鹽才干獲得純品。最-常用的脫鹽辦法是透析。通過(guò)透析袋表里的離子交換,最后使透析袋內溶液的鹽濃度與外界相一致。

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